Comment calibrer un microscope pour la mesure de concentration
Pour déterminer la concentration d'objets (cellules, particules) dans le champ microscopique, un microscope calibré est nécessaire. Il donne : nombre d'objets/mm³ de liquide, longueurs totales. Si non calibré, procédure de calibration concentration/champ de vue via dimensions lame/oculaire.
Matériel
- Microscope composé
- Micromètre de platine
- Lames à profondeur standard (20 µm)
Calibration pour concentration
Placez le micromètre de platine. Allumez. Objectif plus faible grossissement (4x balayage). Réticule oculaire net.
Positionnez et faites le point sur le micromètre de platine. Alignez les deux échelles (parallèles). Zéros superposés.
Calculez l'échelle du réticule (champ de vue) : Comptez les divisions du réticule couvertes. Ex: 25 divisions → champ = 25 × 0,1 mm = 2,5 mm de diamètre (longueur champ). Plus le grossissement augmente, plus le champ diminue.
Préparez la lame profondeur standard (20 µm = 0,02 mm). Volume observé = Surface champ × Profondeur. Surface ≈ π × (diamètre/2)². Pour simplification linéaire souvent utilisée : Volume = Longueur champ × Largeur champ × Profondeur. Ex: 2,5 mm × 2,5 mm × 0,02 mm.
Placez la lame standard. Comptez les objets dans le champ. Concentration = Nombre objets / Volume observé (objets/mm³). Multipliez par volume total échantillon pour total.
Précision : Répétez sur plusieurs champs (aléatoires) et moyenez. Corrigez si distribution non homogène. La calibration doit être refaite si changement objectif, oculaire, ou microscope.