Système GasPak anaérobie : bandelette indicateur et générateur de gaz

Le système GasPak (par BD/BBL et autres) crée des environnements anaérobies pour la microbiologie sans chambre anaérobie. Deux composants le font fonctionner : le sachet générateur de gaz et la bandelette indicateur.

Générateur de gaz : créer l'atmosphère anaérobie

Chimie

Le sachet contient des sels inorganiques (borohydrure de sodium, bicarbonate de sodium) + acide citrique. Quand de l'eau est ajoutée :

NaBH₄ + 2H₂O → NaBO₂ + 4H₂↑ Acide citrique + NaHCO₃ → CO₂↑ + H₂O + Na⁺ citrate

Mélange gazeux produit

• Hydrogène (H₂) : ~10–15 % — réagit avec O₂ résiduel
• Dioxyde de carbone (CO₂) : ~10–15 % — beaucoup d'anaérobies nécessitent CO₂ élevé
• Azote (N₂) : Balance (déplace O₂/N₂ atmosphérique)

Mécanisme d'élimination oxygène

Réaction catalytique sur catalyseur palladium du sachet :

2H₂ + O₂ → 2H₂O (catalysé par Pd)

L'hydrogène réduit l'oxygène en vapeur d'eau. O₂ passe de 21 % à <0,1 % en 30–60 minutes. Le bocal devient anaérobie.

Bandelette indicateur : vérifier l'anaérobiose

Chimie

Contient bleu de méthylène (ou résazurine) indicateur redox :

• Oxydé (O₂ présent) : Bleu (bleu de méthylène) / Rose (résazurine)
• Réduit (Anaérobie) : Incolore (leuco-bleu de méthylène) / Blanc (résazurine réduite)

Interprétation

Couleur bandelette	Signification	Action
Bleu/Rose	Oxygène présent — PAS anaérobie	Vérifier étanchéité, remplacer sachet, prolonger incubation
Incolore/Blanc	Anaérobie atteint	Procéder incubation
Partielle/Intermédiaire	Transition	Attendre plus longtemps ; vérifier étanchéité bocal

Flux opérationnel

1. Ensemencer boîtes gélose (brucella, sang CDC anaérobie, etc.)
2. Placer boîtes dans bocal GasPak
3. Ajouter bandelette indicateur (visible couvercle)
4. Ajouter sachet générateur gaz
5. Ajouter 10–15 mL eau sur sachet (déclenche réaction)
6. Sceller immédiatement le bocal — serrer fermement, vérifier joint
7. Incuber 35–37 °C
8. Vérifier indicateur à 1 h, 24 h — doit être incolore

Facteurs critiques de succès

• Intégrité étanchéité bocal : Joint propre, pas de fissures, pression pince uniforme. Tester immersion eau si doute.
• Sachets frais : Sachets expirés génèrent H₂ insuffisant. Stocker au frais, au sec.
• Activité catalyseur : Palladium empoisonné par H₂S, métaux lourds. Remplacer type sachet périodiquement.
• Besoin CO₂ : Certains anaérobies (ex. Bacteroides) nécessitent 5–10 % CO₂. GasPak fournit ; systèmes alternatifs (AnaeroPack) peuvent ne pas.
• Ne pas ouvrir prématurément : Ré-oxygénation tue anaérobies stricts en minutes.

Alternatives

• AnaeroJar / AnaeroPack (Mitsubishi) : Pas d'eau nécessaire ; sachet générateur CO₂ + sachet absorbeur O₂
• Chambre anaérobie : Boîte à gants avec mélange H₂/N₂/CO₂ — pour gros volumes/travail continu
• Milieux pré-réduits : Oxyrase, PRAS — pour tubes uniques, pas boîtes

Le GasPak reste la référence pour une anaérobiose fiable et vérifiable en laboratoires cliniques et recherche. La bandelette indicateur n'est pas optionnelle — c'est votre preuve que la chimie a fonctionné.