Techniques de coloration au microscope
Les microscopes sont fondamentaux pour l'étude et l'observation de structures très petites, comme les cellules et micro-organismes. L'utilisation de colorants pour colorer sélectivement cellules et échantillons a rendu la microscopie bien plus efficace. Les techniques incluent la coloration pour immunofluorescence, la coloration d'acides nucléiques et la coloration au calcofluor des microsporidies.
Immunofluorescence
Cette technique colore les cellules pour la microscopie d'immunofluorescence, utilisée pour étudier les anticorps — protéines spéciales impliquées dans les réactions de défense de l'organisme. Les techniciens traitent d'abord les échantillons cellulaires avec une solution de méthanol, lavés au phosphate tamponné salin (The Science Advisory Board). Ils ajoutent des anticorps animaux aux cellules. Puis ajoutent PPD (mélange de protéines appelées antigènes) et la solution Tris contrôlant l'acidité. Les anticorps se lient aux antigènes pour les inactiver. Sous la lumière d'un microscope à fluorescence, seules ces molécules liées apparaissent en couleur fluorescente.
Coloration d'acides nucléiques
L'ADN est un acide nucléique dans les cellules. Certains colorants réagissent avec lui, causant une coloration différentielle. Selon The Journal of Histochemistry & Cytochemistry, les colorants commerciaux TOTO-3 et TO-PRO-3 colorent l'ADN en rouge sous microscope à fluorescence, tandis que SYBR Green I et YO-PRO-1 le colorent en vert. Cette méthode est souvent utilisée sur échantillons de tissus animaux congelés.
Coloration au calcofluor
La coloration au calcofluor identifie bactéries et microsporidies, parasites souvent liés aux infections intestinales. Selon le Journal of Clinical Microbiology, le colorant calcofluor est mélangé à de la soude caustique et stocké dans l'obscurité. On ajoute quelques gouttes de cette solution aux échantillons de fèces contaminées. Puis on ajoute le colorant Evans Blue à 0,5 %. On examine au microscope à fluorescence. Les microsporidies deviennent fluorescentes.