Comment utiliser un microscope inversé à fluorescence
Le microscope est l'équipement standard des laboratoires scientifiques pour grossir l'invisible à l'œil nu. En milieu professionnel, on y examine cristaux microscopiques, puces électroniques, cellules, tissus et micro-organismes entiers. La prolifération de microscopes avancés (confocaux à balayage laser) a complexifié les techniques. Les microscopes inversés à fluorescence sont coûteux, demandent une maintenance lourde et une expertise pointue ; on les trouve presque exclusivement dans la recherche professionnelle.
Matériel nécessaire
- Échantillons
- Lames de microscope
- Microscope inversé avec tous les filtres fluorescents
Instructions
- Prérequis terminologiques : Maîtrisez le vocabulaire de la microscopie et de l'imagerie fluorescente. Sans formation (tutoriels ou cours formels), la microscopie à fluorescence inversée est inadaptée aux débutants. Connaissez aussi les composants du microscope.
- Mise sous tension : Allumez la source de champ clair, la caméra et la source UV pour la détection fluorescente. Placez un filtre bloquant/noir pour écranter l'UV jusqu'à l'imagerie fluorescente.
- Installation de l'échantillon : Placez la lame sur la platine, fixez-la avec les ergots. Réglez le condenseur sur « Champ clair » (échantillons teintés/histologie, lumière blanche) ou « Contraste de phase » (non teintés). Localisez l'échantillon à l'oculaire.
- Réglage intensité : Insérez ou changez les filtres neutres fournis pour réduire l'intensité du champ clair. Ajustez grossièrement puis finement la mise au point jusqu'à résolution nette, sans décoloration ni artefacts de réfraction.
- Caméra et logiciel : Démarrez la caméra (généralement via le logiciel du fabricant sur l'ordinateur connecté). Paramétrez échelle, grossissement, objectifs. Mettez le logiciel en « Imagerie en direct » mode « Champ clair ».
- Passage fluorescence : Éteignez la source de champ clair, allumez l'UV. Ajustez l'intensité UV pour moduler le signal fluorescent.
- Acquisition d'image : Basculez le logiciel en « Acquisition d'image ». Réglez ouverture, temps d'exposition, mise au point, etc. Note : l'image oculaire diffère de l'image caméra. Des réajustements extensifs (mise au point, intensité fluorescence) sont toujours nécessaires.